HPLC柱前衍生(shēng)和(hé)柱後衍生(shēng)的相關問題

1）為(wèi)什麽要進行(xíng)衍生(shēng)化？ 衍生(shēng)化的目的是将原本無法直接檢測的組分轉化為(wèi)可(kě)被檢測器(qì)檢測的物質，使被測組分與衍生(shēng)化試劑有(yǒu)選擇性地參與反應，并改變被測組分在色譜柱中的出峰次序，從而實現更好的分離效果。

2）衍生(shēng)化的分類？ 根據發生(shēng)衍生(shēng)化的時(shí)機，化學衍生(shēng)法可(kě)分為(wèi)柱前衍生(shēng)法（pre-column derivatization）和(hé)柱後衍生(shēng)法（post-column derivatization）兩種。柱前衍生(shēng)法在進樣前通(tōng)過衍生(shēng)化反應将樣品轉化為(wèi)衍生(shēng)化産物，然後再經過色譜柱進行(xíng)分離。柱後衍生(shēng)法則是在色譜柱之後，通(tōng)過衍生(shēng)反應改變被測物的物理(lǐ)或化學性質，使其能夠被檢測到。

3）适用于衍生(shēng)化的化合物有(yǒu)哪些(xiē)？ 衍生(shēng)化适用于多(duō)種化合物，包括有(yǒu)機化合物、天然産物、生(shēng)物大(dà)分子（如蛋白質、核酸等）、環境樣品、食品成分、藥物和(hé)藥物代謝産物等。

4）進行(xíng)衍生(shēng)化的要求有(yǒu)哪些(xiē)？ 進行(xíng)衍生(shēng)化的要求包括選擇适當的衍生(shēng)化試劑和(hé)反應條件，确保衍生(shēng)化反應的選擇性和(hé)效果。此外，還(hái)需注意避免産生(shēng)多(duō)種衍生(shēng)化産物，以免給色譜分離帶來(lái)困難。

5）柱前衍生(shēng)和(hé)柱後衍生(shēng)的缺點是什麽？ 柱前衍生(shēng)的缺點是當樣品經過衍生(shēng)化反應後，可(kě)能會(huì)産生(shēng)多(duō)種衍生(shēng)化産物，導緻分離困難。另外，柱前衍生(shēng)允許較長的反應時(shí)間(jiān)和(hé)各種形式的反應器(qì)，但(dàn)需要更多(duō)的處理(lǐ)步驟和(hé)耗時(shí)。 柱後衍生(shēng)的缺點是需要開(kāi)發特定的柱後衍生(shēng)系統，涉及性能、價格和(hé)外形等方面的标準。此外，柱後衍生(shēng)可(kě)能會(huì)增加儀器(qì)的複雜性，并且需要在柱後衍生(shēng)前後進行(xíng)色譜檢測器(qì)的适配。

色譜儀的柱前衍生(shēng)和(hé)柱後衍生(shēng)
色譜儀的衍生(shēng)化主要是為(wèi)了提高(gāo)目的物的可(kě)檢測性。對于氣相色譜，主要是為(wèi)了增強目的物的揮發性或改善目的物的極性。對于液相色譜儀，主要是為(wèi)了提高(gāo)檢測器(qì)對目的物的響應。

一、衍生(shēng)化分類：

1、柱前衍生(shēng)：在分析物經過色譜柱前與衍生(shēng)劑反應，反應産物在色譜柱上(shàng)實現分離，實際分離的是衍生(shēng)産物，檢測的也是衍生(shēng)産物。

2、柱後衍生(shēng)：分析物在色譜柱中實現分離後，在衍生(shēng)池內(nèi)與衍生(shēng)劑反應，檢測的是衍生(shēng)産物。

二、适用的化合物：

生(shēng)物酸、生(shēng)物堿、胺類、抗生(shēng)素和(hé)氨基酸類等。

三、衍生(shēng)化要求：

1、衍生(shēng)劑必須過量且穩定。衍生(shēng)劑不過量，反應不完全，檢測不充分。衍生(shēng)劑不穩定，重現性差。

2、衍生(shēng)劑、衍生(shēng)産物和(hé)衍生(shēng)副産物容易分離。隻能檢測到衍生(shēng)産物。

3、衍生(shēng)反應快速、完全。

四、柱前衍生(shēng)特點：

1、優點：

（1）相對自由地選擇反應條件。

（2）不存在反應動力學的限制(zhì)。

（3）衍生(shēng)副産物可(kě)進行(xíng)預處理(lǐ)。

（4）容易允許多(duō)步反應的進行(xíng)。

（5）有(yǒu)較多(duō)的衍生(shēng)劑可(kě)選擇。

（6）不需要複雜的儀器(qì)設備。

2、缺點：

（1）形成的衍生(shēng)副産物可(kě)能對色譜分離造成較大(dà)困難。

（2）在衍生(shēng)化過程中，容易引入雜質，或損失樣品。

五、柱後衍生(shēng)特點：

1、優點：

（1）重現性好，影(yǐng)響因素少(shǎo)，引入物質比較少(shǎo)。

（2）分析物可(kě)以在其原有(yǒu)的形式下進行(xíng)分離，容易選用已有(yǒu)的分析方法。

2、缺點：

（1）對于一定的溶劑和(hé)有(yǒu)限的反應時(shí)間(jiān)來(lái)說，目前隻有(yǒu)有(yǒu)限的反應可(kě)供選擇。

（2）可(kě)能有(yǒu)擴散問題。

（3）需要額外的儀器(qì)設備。