液相色譜儀柱後衍生(shēng)熒光檢測法是一種高(gāo)效、靈敏和(hé)可(kě)靠的方法，用于測定肉制(zhì)品中甲萘威殘留量。該方法基于液相色譜技(jì)術(shù)，通(tōng)過柱後衍生(shēng)反應将甲萘威轉化為(wèi)具有(yǒu)熒光性質的物質，然後利用熒光檢測器(qì)進行(xíng)檢測。
首先，将肉制(zhì)品樣品進行(xíng)預處理(lǐ)，提取出其中的甲萘威殘留物。然後将提取液進行(xíng)淨化處理(lǐ)，去除雜質，得(de)到純淨的甲萘威溶液。接下來(lái)，将甲萘威溶液注入液相色譜儀中，通(tōng)過色譜柱進行(xíng)分離。在分離過程中，甲萘威在色譜柱中被洗脫，并與其他雜質分離。
随後，将分離後的甲萘威溶液流經柱後衍生(shēng)反應器(qì)，與适當的衍生(shēng)試劑進行(xíng)反應。在反應過程中，甲萘威被轉化為(wèi)具有(yǒu)熒光性質的物質。這種熒光物質可(kě)以很(hěn)容易地被熒光檢測器(qì)檢測到。
最後，通(tōng)過液相色譜儀的軟件系統對檢測到的熒光信号進行(xíng)處理(lǐ)和(hé)分析。根據熒光信号的強度，可(kě)以計(jì)算(suàn)出甲萘威的殘留量。
該方法具有(yǒu)以下優點：首先，它采用了液相色譜技(jì)術(shù)，可(kě)以對複雜的樣品進行(xíng)高(gāo)效分離和(hé)淨化，從而提高(gāo)測定的準确性和(hé)可(kě)靠性。其次，通(tōng)過柱後衍生(shēng)反應将甲萘威轉化為(wèi)熒光物質，提高(gāo)了檢測的靈敏度。最後，利用熒光檢測器(qì)進行(xíng)檢測，可(kě)以避免幹擾物質的幹擾，提高(gāo)檢測的準确性。
總之，液相色譜儀柱後衍生(shēng)熒光檢測法是一種适用于測定肉制(zhì)品中甲萘威殘留量的有(yǒu)效方法。它具有(yǒu)高(gāo)效、靈敏和(hé)可(kě)靠的特點，可(kě)以廣泛應用于食品檢測和(hé)質量控制(zhì)領域。
一、液相色譜儀柱後衍生(shēng)熒光檢測法測定肉制(zhì)品中甲萘威殘留量的原理(lǐ)：
用丙酮-石油醚混合溶液提取樣品中的甲萘威殘留物，經凝膠層析柱淨化後，濃縮，高(gāo)效液相色譜儀分離，經柱後衍生(shēng)後，用熒光檢測器(qì)檢測，外标法定量。
二、試劑和(hé)溶液配制(zhì)：
1、試劑和(hé)材料：
1.1 乙腈（CH3CN）：色譜純。
1.2 乙酸乙酯（C4H8O2）：色譜純。
1.3 環己烷（C6H12）:色譜純。
1.4 丙酮（CH3COCH3）：色譜純。
1.5 石油醚：沸程30℃～60℃。
1.6 無水(shuǐ)硫酸鈉（Na2SO4）：650℃灼燒4 h，在幹燥器(qì)內(nèi)冷卻至室溫，貯于密封瓶中備用。
1.7 氯化鈉（NaCl）。
1.8 柱後衍生(shēng)試劑。
1.9 鄰苯二甲醛（C8H602，O-Phthaladehyde,OPA）。
1.10 巯基乙醇（C2H6OS，Thiofluor）。
2、溶液配制(zhì)：
2.1 NaOH溶液（0.2%,m/v）：取2 gNaOH，以水(shuǐ)定容至1000 mL。
2.2 鄰苯二甲醛稀釋液：硼砂溶液（0.4%, m/v）。
2.3 鄰苯二甲醛試液：溶劑儲罐中注入 945 ml OPA 稀釋劑，用惰性氣體(tǐ)(氮氣 )吹掃至少(shǎo) 10 min， 100 mg OPA 固體(tǐ)溶解于約 10 mL 的色譜純甲醇中，将 OPA 溶液加入除氧的 OPA 稀釋劑中，溶解 2 g 巯 基乙醇固體(tǐ)于 5mL OPA 稀釋劑中，加入到儲罐中，蓋上(shàng)瓶蓋，打開(kāi)氣流，再不斷的吹掃幾分鍾，關閉排 氣閥，輕輕地攪動溶劑以使其完全混合。
2.4 乙酸乙酯-環己烷混合溶液（1+1,v/v）：取100 mL乙酸乙酯，加入100 mL環己烷，搖勻備用。
3、标準品溶液配制(zhì)：
3.1 甲萘威：分子式 C12H11NO2，CAS 63-25-2，純度>99.5 %。
3.2 甲萘威标準儲備液：準确稱取适量的甲奈威标準品，以乙腈溶解，4℃冰箱保存，有(yǒu)效期為(wèi)6個(gè) 月。保存于4℃冰箱內(nèi)。
3.3 甲萘威标準工作(zuò)液：取一定量的标準儲備液，用乙腈稀釋至适當濃度，4℃冰箱保存，有(yǒu)效期為(wèi) 1周。保存于4℃冰箱內(nèi)。
三、儀器(qì)設備：
1、液相色譜儀：配有(yǒu)熒光檢測器(qì)和(hé)柱後衍生(shēng)單元。
2、分析天平：感量 0.01 g 和(hé) 0.0001 g。
3、全自動凝膠色譜儀（配有(yǒu)餾分收集濃縮器(qì)）。
4、旋轉蒸發裝置。
5、氮吹儀。
6、組織勻漿機。
7、振蕩器(qì)
四、試樣制(zhì)備：
1、試樣制(zhì)備：
1.1 肉 将所取全部樣品，充分攪碎混勻，取有(yǒu)代表性的樣品，總量不少(shǎo)于500 g，裝入清潔容器(qì)內(nèi)，密封 并标明(míng)标記。
1.2 罐頭 将所取全部樣品整罐倒出，充分攪碎混勻，取有(yǒu)代表性的樣品，總量不少(shǎo)于500 g，裝入清潔容器(qì) 密封并标明(míng)标記。
2、試樣保存：試樣應于-18℃以下保存。在抽樣和(hé)制(zhì)樣的操作(zuò)中，應防止樣品受到污染或發生(shēng)含量的變化，以保證實驗樣品能代表總體(tǐ)樣本。
五、分析步驟：
1、提取：
稱取試樣 20 g（精确到 0.01 g）,于 100 mL 具塞三角瓶中，加水(shuǐ) 6 mL（視(shì)樣品水(shuǐ)分含量加水(shuǐ)使總 水(shuǐ)量約 20 g，肉通(tōng)常在 70%左右，加水(shuǐ) 6 mL），加 40 mL 丙酮，勻漿 1 min,加氯化鈉 6 g，充分搖勻， 再加 30 mL 石油醚，振搖 30 min。取 35 mL 有(yǒu)機層上(shàng)清液，經無水(shuǐ)硫酸鈉濾于旋轉蒸發瓶中，濃縮至 約 1 mL，加 2 mL 乙酸乙酯-環己烷溶液再濃縮，如此重複 3 次。乙酸乙酯-環己烷定容為(wèi) 5 mL，0.45 μ m 濾膜過濾，待淨化。
2、凝膠色譜（GPC）淨化：
2.1、凝膠色譜淨化參考條件：
a） 淨化柱：400 mm×30 mm, Bio Beads S-X3,或相當者。
b） 流動相：乙酸乙酯-環己烷。
c） 流速：5.0 mL/min。
d） 樣品定量環：5 mL。
e） 餾分收集段：10.0 min~15.0 min。
f） 淨化柱平衡時(shí)間(jiān)：5 min。
2.2、凝膠色譜濃縮參考條件：
a）樣品濃縮條件見表 1。
a）樣品濃縮條件見表 1。
b）濃縮終點判定：液位傳感模式。
c）溶劑替換：2 mL 乙腈，重複兩次。
d）定容體(tǐ)積：1 mL。
3、測定：
3.1、液相色譜參考條件：
a) 色譜柱：C18，250 mm×4.6 mm×5μm，或相當者；
b) 柱溫：42℃；
c) 熒光檢測器(qì)：λex 330nm，λem 465nm；
d) 流動相：乙腈+水(shuǐ)（40+60，體(tǐ)積比）；
e) 流速：1.0 mL/min；
f) 進樣量：20 L。
3.2、柱後衍生(shēng)：
a) 衍生(shēng)試劑1：水(shuǐ)解試劑，0.4%的氫氧化鈉溶液，流速0.4 mL/min；
b) 衍生(shēng)試劑2：OPA 試劑，流速0.4 mL/min；
c) 反應器(qì)溫度：水(shuǐ)解溫度為(wèi)100℃，衍生(shēng)溫度為(wèi)室溫。
3.3、色譜測定：
根據樣液中被測甲萘威的含量情況，選定濃度相近的标準工作(zuò)液，其響應值應在方法檢測的線性範 圍內(nèi)。在上(shàng)述液相色譜條件下，甲萘威保留時(shí)間(jiān)為(wèi) 11.1 min。
六、結果計(jì)算(suàn)：
